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稳定细胞株构建
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稳转株即稳定表达的细胞株,指基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。
稳转株构建原理
通过将外源基因cDNA或shRNA克隆到带有某种筛选基因的载体上,重组载体通过转染或感染进入宿主细胞中,并能随细胞分裂稳定传递下去,再用载体中所含筛选基因进行筛选得到。
稳转株构建方法
目前常用到的方法有用脂质体或电穿孔法转染质粒和病毒感染,通常可使用的病毒包括慢病毒(Lentivirus),腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV),逆转录病毒(Retrovirus)等。
病毒表达系统 |
慢病毒表达系统 |
AAV表达系统 |
逆转录病毒表达系统 |
病毒基因组 |
RNA病毒 |
双链DNA病毒 |
RNA病毒 |
是否整合 |
病毒基因组整合于宿主基因组,长时间稳定表达外源基因 |
病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 |
病毒基因组整合于宿主基因组,长时间稳定表达外源基因 |
感染细胞类型 |
分裂和不分裂的细胞,原代细胞,也可用于体内实验 |
分裂和不分裂的细胞 |
感染分裂细胞,但在干细胞中表达效率低 |
表达水平 |
高水平表达 |
高水平表达 |
高水平表达 |
表达时间 |
慢 |
快 |
快 |
免疫原性 |
低免疫原性 |
高免疫原性 |
低免疫原性 |
滴度 |
滴度高达1E8 TU/ml |
滴度高达1E12 TU/ml |
滴度高达1E8 TU/ml |