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稳定细胞株构建

 

 

稳转株即稳定表达的细胞株,指基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。

 

 

稳转株构建原理

通过将外源基因cDNA或shRNA克隆到带有某种筛选基因的载体上,重组载体通过转染或感染进入宿主细胞中,并能随细胞分裂稳定传递下去,再用载体中所含筛选基因进行筛选得到。

 

 

稳转株构建方法

目前常用到的方法有用脂质体或电穿孔法转染质粒和病毒感染,通常可使用的病毒包括慢病毒(Lentivirus),腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV),逆转录病毒(Retrovirus)等。

 

 

 

病毒表达系统

慢病毒表达系统

AAV表达系统

逆转录病毒表达系统

病毒基因组

RNA病毒

双链DNA病毒

RNA病毒

是否整合

病毒基因组整合于宿主基因组,长时间稳定表达外源基因

病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因

病毒基因组整合于宿主基因组,长时间稳定表达外源基因

感染细胞类型

分裂和不分裂的细胞,原代细胞,也可用于体内实验

分裂和不分裂的细胞

感染分裂细胞,但在干细胞中表达效率低

表达水平

高水平表达

高水平表达

高水平表达

表达时间

免疫原性

低免疫原性

高免疫原性

低免疫原性

滴度

滴度高达1E8 TU/ml

滴度高达1E12 TU/ml

滴度高达1E8 TU/ml

  • 服务流程

     


     

  • 构建步骤